1. NK細胞による老化細胞の認識メカニズム

NK細胞は、標的となる細胞の表面状態を2つの主要なシグナルで判断します。

NKG2Dリガンドの発現（活性化シグナル）： 老化細胞は、ストレス応答としてNKG2Dリガンド（MICA/Bなど）を細胞表面に多く発現します。NK細胞表面にある受容体「NKG2D」がこのリガンドを検知すると、NK細胞は活性化し、老化細胞を攻撃します。
MHC-Iの減少（抑制性シグナルの解除）： 正常な細胞はMHC-I分子を発現しており、これがNK細胞の抑制性受容体と結合することで攻撃を回避しています。しかし、老化細胞やがん細胞は細胞老化に伴うタンパク質分解の低下や、細胞内の恒常性維持機構（オートファジーなど）の破綻により、MHC-Iの産生や細胞膜への輸送が低下し、その発現が低下・消失していることが多く、NK細胞の「自己認識」から外れて攻撃対象となります。 一方で、MHC-Iが減少すると、T細胞は老化細胞を「異常」として認識しにくくなり、キラーT細胞による攻撃を回避しやすくなります。これにより、老化細胞は生体内に蓄積しやすくなります。

2. NK細胞による除去（老化除去）

NK細胞のNKG2Dは老化細胞のNKG2Dリガンドを認識し、MHC-Iの低下（”Missing self”）が重なると、NK細胞は強力に活性化して、パーフォリンやグランザイムを放出し、老化細胞をアポトーシス（細胞死）へ誘導します。

3. MHC-I減少とMICA/B増加という相反現象

老化細胞では、免疫から逃れるための「MHC-I減少（T細胞回避）」と、免疫に攻撃される「MICA/B増加（NK細胞攻撃）」という、矛盾する（あるいは対抗する）動態が同時に起きていることが考えられます。
最終的には老化初期や特定の組織環境では、MICA/Bを介したNK細胞による排除が機能します。しかし、慢性的な老化細胞の蓄積においては、MHC-I減少（およびその他の免疫抑制シグナル）が上回り、NK細胞の能力低下とも相まって、老化細胞が慢性的に蓄積すると考えられています。老化細胞では、MHC-Iが低下してキラーT細胞の監視を潜り抜ける一方で、MICA/Bが増加してNK細胞の攻撃を誘発しやすくなっています。この攻防の中で、結果として免疫系による除去が追いつかなくなり、老化細胞が組織に蓄積していきます。

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最近、ステージIV期の胆膵系悪性腫瘍の患者さんに当該幹細胞培養上清液を投与する機会がありました。

2023年4月より2024 年3月中旬まで化学療法施行。全身状態の低下で化学療法中止。上清液を3月下旬より開始5月始めまで10mgを計3回投与。5月8日まで腫瘍マーカーの上昇が抑えられていたが、5月8日以降、胆管炎の併発もあり、再上昇した。

2023年4月より2024 年3月下旬まで化学療法施行。その後、全身状態悪化に伴い、白血球数は減少傾向であったが、上清液を3月下旬より開始してから単球数＊の上昇傾向が見られ（→）、免疫能が回復してきた可能性が示唆された。４月に抗がん剤の副作用による白血球減少のあと、胆管炎を併発した。
＊：単球数を免疫能の1指標とした

図で示すように、腫瘍マーカーの急激な上昇はなく、単球数の回復が見られたこと、がん性疼痛に対しオキシコンチンを投与されていましたが、上清液開始前、１日３回が、開始後１日１回まで減じることができました。上清液投与により免疫能の回復、疼痛コントロールに一定程度の効果があったと推測されます。

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腫瘍抗原の喪失
腫瘍抗原にはがん細胞だけに存在する「腫瘍特異抗原（ネオアンチゲン）」と、正常細胞にも存在するがん細胞で過剰に発現している「腫瘍関連抗原」の2種類があります。
がん細胞は成長する過程で、遺伝子変異が起こりやすく、腫瘍抗原が変化するため、T細胞（キラーT細胞やCAR-T細胞）はこれらの抗原を認識することができず攻撃できません。腫瘍関連抗原であるCD19、HER2やClaudin18.2を標的としたCAR-T細胞療法やキラーT細胞療法の効果がしばしば減弱するメカニズムです。一方、ネオアンチゲンはがん細胞の遺伝子変異によって生じる、正常細胞には存在しない異常なペプチドで、MHCクラスI分子を介して細胞表面に提示されます。キラーT細胞（CD8陽性T細胞）はこれを異物と認識し、攻撃します。がん細胞は成長する過程で、MHCクラスI分子発現を低下させ、ネオアンチゲンを表面に提示させないようにして、免疫逃避を図ります。しかし、MHCクラスI分子発現が低下した細胞はNK細胞に認識され餌食になります。

腫瘍微小環境における免疫抑制細胞の動員
がん細胞は単独で存在するのではなく、周囲の正常細胞を味方につけて、免疫細胞の活動を強力に抑え込む「免疫抑制的」な環境（腫瘍微小環境）を構築します。がん細胞は制御性T細胞（Treg）を積極的に呼び寄せ、キラーT細胞の活性を直接的に阻害したり、抑制性サイトカイン（TGF-βやIL-10）を放出させたりして、がん細胞に対する免疫反応が起こりにくくします。Treg同様、強力な免疫抑制能力を有している骨髄由来抑制細胞（MDSC）は、未熟な骨髄系細胞の集団で、通常は炎症時などに一時的に現れますが、がん細胞が出す因子によって骨髄から動員され、腫瘍組織やリンパ組織で増殖します。MDSCは、活性酸素種（ROS）、一酸化窒素（NO）などを産生し、T細胞の増殖や機能を麻痺させて、がんに対する免疫反応を抑制します。NK細胞に発現するFas ligandはTregやMDSCに発現するFAS抗原を認識し、アポトーシスを誘導し排除します。
一方、マクロファージは本来、異物を貪食し排除する細胞ですが、腫瘍環境下ではがん細胞の生存を助けるM2型と呼ばれるタイプ（腫瘍関連マクロファージ：TAM）に変化します。TAMは血管新生を促進してがん細胞への栄養供給を助けるだけでなく、免疫抑制因子を出してT細胞の攻撃をブロックします。NK細胞のエクソソーム中にはM2マクロファージ（免疫抑制型）をM1マクロファージ（免疫刺激型）へ分化促進するmiR146a,21,155が含まれております。

PD-L1発現によるT細胞の免疫ブレーキ
活性化したT細胞の表面には、PD-1という受容体が発現します。これは本来、過剰な免疫反応で正常組織を傷つけないためのブレーキスイッチです。がん細胞は、このスイッチを押すためのリガンドであるPD-L1という分子を自らの表面に大量に発現します。キラーT細胞ががん細胞を認識して近づいても、がん細胞側のPD-L1がT細胞側のPD-1と結合すると、T細胞内部に抑制シグナルが伝わり、攻撃能力を失ってしまいます。このような状態はNK細胞では解決できないため、免疫チェックポイント阻害剤により、がん細胞のPD-L1をブロックして、免疫ブレーキを解除する必要があります。

慢性的な抗原曝露によるT細胞疲弊遺伝子発現
がん組織内では、常に抗原が存在するため、T細胞は慢性的に刺激を受け続けます。このような環境下では、T細胞に内在する疲弊遺伝子（BATFやTOX）が発現し、「疲弊」と呼ばれる状態に陥ります。疲弊したT細胞は、PD-1だけでなく、TIM-3やLAG-3といった複数の免疫応答抑制性受容体を高く発現し、増殖能力やサイトカイン産生能力、細胞傷害活性を失います。NK細胞の分泌するエクソソーム中には疲弊遺伝子の発現を抑制するmiR155が存在し、T細胞の疲弊を回避して、免疫能を回復させます。

免疫抑制性サイトカインの放出
がん細胞は自ら、あるいは周囲の細胞（腫瘍微小環境）に働きかけて、免疫を抑えるサイトカイン（情報伝達物質）を撒き散らします。TGF-β（トランスフォーミング増殖因子ベータ）はその代表格で、キラーT細胞やNK細胞の働きを直接抑えるだけでなく、線維芽細胞を活性化して物理的なバリアを作らせ、免疫細胞ががん細胞に到達できないようにします。IL-10もまた、抗原提示細胞の機能を低下させ、免疫応答全体を沈静化させる方向に働きます。また、これらのサイトカインは樹状細胞を未熟化し、抗原提示能を低下させることが知られています。

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Loss of Tumor Antigens
There are two types of tumor antigens: “tumor-specific antigens (neoantigens)” that exist only on cancer cells, and “tumor-associated antigens” that are also present on normal cells but are overexpressed on cancer cells.
As cancer cells grow, gene mutations are likely to occur, changing tumor antigens. Therefore, T cells (killer T cells and CAR-T cells) cannot recognize or attack these antigens. This is the mechanism by which the effectiveness of CAR-T cell therapy and killer T cell therapy targeting tumor-associated antigens such as CD19, HER2, and Claudin 18.2 is often reduced. On the other hand, neoantigens are abnormal peptides that arise from gene mutations in cancer cells and are not present on normal cells. They are presented on the cell surface via MHC class I molecules. Killer T cells (CD8-positive T cells) recognize these as foreign substances and attack them. As cancer cells grow, they reduce MHC class I molecule expression, preventing neoantigens from being presented on the surface and thus attempting to evade the immune system. However, cells with reduced MHC class I molecule expression are recognized by NK cells and become prey.

Recruitment of Immunosuppressive Cells in the Tumor Microenvironment
Cancer cells do not exist in isolation; they enlist the help of surrounding normal cells to create an “immunosuppressive” environment (tumor microenvironment) that strongly suppresses the activity of immune cells. Cancer cells actively recruit regulatory T cells (Tregs), directly inhibiting the activity of killer T cells or causing them to release suppressive cytokines (TGF-β and IL-10), making it difficult for an immune response to occur against cancer cells. Myeloid suppressor cells (MDSCs), which, like Tregs, possess strong immunosuppressive capabilities, are a population of immature myeloid cells that normally appear temporarily during inflammation, but are recruited from the bone marrow by factors released by cancer cells and proliferate in tumor tissue and lymphoid tissue. MDSCs produce reactive oxygen species (ROS), nitric oxide (NO), etc., paralyzing the proliferation and function of T cells and suppressing the immune response to cancer. Fas ligand expressed on NK cells recognizes the FAS antigen expressed on Tregs and MDSCs, inducing apoptosis and eliminating them. On the other hand, macrophages are cells that normally engulf and eliminate foreign substances, but in a tumor environment, they change into a type called M2 macrophages (tumor-associated macrophages: TAMs) that help cancer cells survive. TAMs not only promote angiogenesis and help supply nutrients to cancer cells, but also release immunosuppressive factors that block attacks by T cells. NK cell exosomes contain miR146a,21,155, which promote the differentiation of M2 macrophages (immunosuppressive type) into M1 macrophages (immunostimulatory type).

Immune Brake of T Cells Caused by PD-L1 Expression
Activated T cells express a receptor called PD-1 on their surface. This is normally a brake switch that prevents damage to normal tissues by excessive immune responses. Cancer cells express large amounts of a molecule called PD-L1, which is a ligand for activating this switch, on their surface. Even when killer T cells recognize cancer cells and approach them, if the PD-L1 on the cancer cell binds to the PD-1 on the T cell, an inhibitory signal is transmitted inside the T cell, causing it to lose its ability to attack. Since NK cells cannot resolve this situation, it is necessary to block the PD-L1 on cancer cells using immune checkpoint inhibitors to release the immune brake.

Chronic Antigen Exposure Leads to T Cell Exhaustion Gene Expression
In cancer tissue, antigens are constantly present, leading to chronic stimulation of T cells. Under these conditions, T cell-derived exhaustion genes (BATF and TOX) are expressed, resulting in a state called “exhaustion.” Exhausted T cells highly express not only PD-1 but also multiple immunosuppressive receptors such as TIM-3 and LAG-3, losing their proliferative capacity, cytokine production capacity, and cytotoxic activity. Exosomes secreted by NK cells contain miR155, which suppresses the expression of exhaustion genes, thus preventing T cell exhaustion and restoring immune function.

Release of Immunosuppressive Cytokines
Cancer cells release cytokines (signaling molecules) that suppress the immune system, either by themselves or by acting on surrounding cells (tumor microenvironment). TGF-β (transforming growth factor beta) is a prime example; it not only directly suppresses the function of killer T cells and NK cells, but also activates fibroblasts to create a physical barrier, preventing immune cells from reaching cancer cells. IL-10 also works to reduce the function of antigen-presenting cells, thereby calming the overall immune response. Furthermore, these cytokines are known to impair dendritic cells, reducing their antigen-presenting ability.

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Treatment mechanism
• Role of NK cells
NK (natural killer) cells are innate immune cells that find, attack, and destroy cancer and virus-infected cells.
• Treatment flow:
1. Collect patient’s blood and isolate NK cells.
2. Activate NK cells in a dedicated facility and multiply them from hundreds of millions to billions.
3. The activated NK cells are returned to the patient’s body via an intravenous drip.

• Effects:
Activated NK cells are expected to attack cancer cells through circulation in the body, suppressing cancer growth or reducing cancer size. It is also expected to be effective in preventing recurrence and metastasis after surgery.

Features and expected effects
• Fewer side effects: Because it uses your own immune cells, it is said to have fewer side effects than transplanting someone else’s cells.
• Combination with other treatments: Synergistic effects can be expected when combined with other treatments such as chemotherapy and radiation therapy.
• Cancer prevention: With permission from the Ministry of Health, Labor and Welfare, it can also be used to replenish NK cells for cancer prevention.
At our hospital, in order to further increase the activity of NK cells, we inject exosomes secreted by NK cells intravenously to enhance the antitumor effect. It is expected to be more effective than conventional NK cell therapy, so we believe it is suitable for patients whose cancer is more advanced and whose immune system is weakened.

The progress of an example is shown below.

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It prevents unnecessary genes from functioning, creating individual cells and maintaining the normal functioning of our bodies.

However, when DNA methylation becomes abnormal, it can inhibit the function of genes necessary for each cell, or promote genes that should be suppressed.

For example, it has been found that when cancer cells are collected, abnormalities in DNA methylation are present. While cancer is normally prevented by the action of tumor-suppressing genes, in some cases, abnormalities in methylation can prevent these tumor-suppressing genes from functioning, leading to cancer development.

In such cases, it is believed that if DNA methylation can be normalized using drugs that control the epigenetic state, it may be possible to treat the cancer.

Can cancer be cured by reprogramming (resetting) cancer cells?

It is believed that repairing gene mutations or epigenetic abnormalities can reverse cancerous transformation back to normal.

Similar to the reprogramming of somatic cells into iPS cells, the concept of reprogramming cancer cells to return them to normal cells is becoming established.

There have been published reports of reprogramming mouse melanoma cells, which are cancer cells, and other research teams have also announced that when they added two types of chemical substances, including anticancer drugs, to human liver cancer stem cells in a culture dish, 85-90% of the cancer cells became normal liver cells after two days. Furthermore, they succeeded in reprogramming iPS cells by adding two genes and two types of chemical substances, and returning them to normal liver cells.

We have identified miR-520d, which promotes the formation of iPS cells in cancer cells, among the approximately 2700 types of miRNAs already known. We have found that small molecule compounds that inhibit the methylation-related enzymes HAT1 and KAT8 enhance the function of miR-520d. Furthermore, these compounds have been shown to upregulate the tumor suppressor gene p53, thereby inducing apoptosis in cancer cells. At our hospital, we propose cancer treatment by administering these compounds to demethylate and reprogram cancer cells. Several clinical cases have suggested efficacy against cancer, and no serious adverse events have been reported.

Reprogramming therapy, which involves administering genes or chemical substances to restore cells to a normal state, is expected to lead to treatments for cancer and diabetes. It has been reported that major pharmaceutical companies are focusing their development efforts on this therapy, as it is seen as a treatment with no side effects and the potential to cure even intractable diseases.

However, a problem exists: even if cancer cells are reprogrammed into normal cells, to actually achieve cancer treatment, it’s necessary to reprogram cancer cells in the living body, not just in a culture dish, with 100% efficiency. Generally, even early-stage cancers detected by imaging tests are thought to consist of 100 million cancer cells. Even if 99.9% of cancer cells could be reprogrammed into normal cells, 100,000 cancer cells would still be needed for recurrence, making it insufficient from the perspective of a complete cure.

Therefore, Saisei no Mori Clinic Roppongi has devised the Saisei no Mori cancer treatment method, which uses these small molecule compounds to shrink cancer to one-thousandth of its original size, a level at which cancer immunotherapy is effective, and then treats the remaining cancer cells in combination with NK cell therapy, macrophage activation therapy, and other therapies. It is expected to be particularly effective against advanced, highly malignant undifferentiated or poorly differentiated cancers. It can also be used as a second opinion for cancer treatment.

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NKT Cell Targeted Therapy
Monocytes (dendritic cell progenitor cells) are collected from the patient’s blood via apheresis and cultured in vitro to form dendritic cells. Then, the glycolipid “α-galactosylceramide (α-GalCer)” is bound to the CD1d molecule of the dendritic cells to create an “α-GalCer-presenting dendritic cell (α-GalCer-DC) complex,” which is then returned to the body via intravenous infusion. When NKT cells recognize this complex with a receptor called the invariant T cell receptor, they are activated en masse, releasing large amounts of the cytokine interferon-γ, which primarily calls upon NK cells (innate immunity) and killer T cells (CD8+ T cells) (adaptive immunity) to powerfully attack cancer cells. Activated NKT cells also attack cancer cells, but their direct cytotoxic activity is limited due to the small amount present in the body. Furthermore, some activated immune cells become memory cells (such as memory T cells) and remain in the body, forming long-term immune memory and preventing cancer recurrence and metastasis. In addition, they mature dendritic cells whose function has been impaired by cancer, improving the immunosuppressed state.

The main difference between NK cells and NKT cells is that NK cells belong to innate immunity and directly attack cancer cells and other pathogens in an MHC-independent manner, while NKT cells possess the properties of both T cells and NK cells, recognizing lipid antigens via MHC molecules (CD1d) and performing both potent immunomodulation (cytokine production) and direct attack. The differences are shown in the table below.

Difference between NK cell and NKT cell therapy

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しかしながら、DNAのメチル化が異常を起こしますと、それぞれの細胞にとって必要な遺伝子の働きを阻害することや、抑制されなければならない遺伝子を促進してしまう場合が出てきます。

たとえば、がんの細胞を採取するとDNAのメチル化に異常があることが分かっています。がんは、がんを抑制する遺伝子の働きによって防がれているのですが、たとえば、メチル化の異常によってがん抑制遺伝子が働かなくなり、発がんするケースもあります。

このような場合は、エピジェネティクス状態を制御する薬剤によってDNAのメチル化を正常化することができれば、がんを治療することも可能になると考えられているのです。

がん細胞をリプログラミング（初期化）すると癌が治る？
遺伝子変異またはエピジェネティクス異常を修復すれば癌化を正常に戻す事ができると考えられます。
体細胞からiPS細胞へのリプログラミングと同様に癌細胞をリプログラミングすることで正常な細胞に戻すという概念が定着しています。

がん細胞であるマウスメラノーマ細胞をリプログラミングさせたという論文報告があり、他の研究チームからも、培養皿でヒト肝がん幹細胞に抗がん剤など2種類の化学物質を加えると、2日後、85～90％のがん細胞が正常の肝細胞になり、さらに2遺伝子と2種類の化学物質を加えてiPS細胞にリプログラミングさせ、正常な肝細胞に戻すことにも成功したと発表しています。

私どもは、すでにわかっている約2700種類のmiRNAの中で、がん細胞のiPS化を促進するmiR-520dを見出しました。メチル化関連酵素であるHAT1やKAT8の阻害作用を有する低分子化合物がこのmiR-520dの働きを高めることが判明しました。さらにこれらの化合物はがん抑制遺伝子であるp53遺伝子をアップレギュレートして、がんのアポトーシスを誘導することも認められています。当院ではこれらの化合物を投与して、がん細胞の脱メチル化とリプログラミングによるがん治療を提案しております。いくつかの臨床例ではがんに対する有効性が示唆されており、重篤な有害事象も報告されておりません。

このように遺伝子や化学物質を与えて細胞を正常に戻すリプログラミング療法は、がんや糖尿病の治療につながると期待されています。副作用がなく、難病も根治できる治療になるとして、大手製薬会社も開発に力を入れつつあると報道されています。

ただ問題点として、がん細胞が正常細胞にリプログラミングされたとしても、実際にがん治療を実現させるためには、培養皿中ではく、生体中のがん細胞を100％の効率で正常細胞へリプログラミングする必要があります。一般的に、画像検査で発見される早期がんでも1億個のがん細胞からなると考えられています。仮に99.9％の効率でがん細胞を正常細胞へリプログラミングできたとしても、10万個のがん細胞から再発することになるため、根治という観点からすると不十分であると言えます。

そこで、犀星の杜クリニック六本木ではこれらの低分子化合物を用いて、がん免疫療法が有効に作用するレベルである1000分の一までがんを縮小させ、残存したがん細胞をNK細胞療法やマクロファージ活性化療法などを併用してがんを治療する犀星の杜がん治療法を考案しました。特に進行した悪性度の高い未分化や低分化がんに威力を発揮することが期待されています。がん治療のセカンドオピニオンとしても活用していただけます。

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iPS細胞研究における最大の発見は，山中4因子と呼ばれる4つの遺伝子Oct4, Sox2, Klf4, cMycだけで，あらゆる体細胞が新たな多能性幹細胞（iPS細胞）になることを見出したことです。山中4因子により、メインスイッチが入って幹細胞の遺伝子発現制御機構が働き出すと，この外来性の山中4因子はもはや不要となり，体細胞だったときに眠っていた遺伝子群が活発に未分化性を維持するようになります．このように発生を巻き戻して未分化に戻す因子を，リプログラミング因子（再初期化因子）と呼びます。

ガードンの研究

ガードンの研究は、オタマジャクシの腸管の上皮細胞という、受精卵からかなり発生が進んで分化した体細胞の核を、核を取り除いた未受精卵に移植して、そこからもう一度オタマジャクシに発生させることに1962年に成功しました。腸の細胞をもう一度体中のすべての細胞をつくり個体を生み出せる状態に戻したので、これを体細胞のリプログラミング（再初期化）といいました。しかし、移植された核は、履歴を残したままですので、最初の受精卵の状態に戻せてはいません。完全に初めの状態に戻すリセット（初期化）とは異なります。

このガードンの方法で再初期化した細胞を用いると、元の細胞と同じ遺伝情報セットをもつクローンカエルが作れますが、「iPS細胞からはヒトのクローンは作れない」と言われています。厳密にいうとiPS細胞で卵子と精子を作り受精させて母体に入れれば、理論的に可能ることが必要ですが、その際減数分裂によって遺伝的な多様性が生まれるため、親と同一の遺伝子を持つクローンは生まれません。ただし、クローンに近い個体が誕生させることは可能で、しかもiPS細胞を経由することで、一度再初期化（リプログラミング）されるため、クローン特有の健康異常＊が軽減される可能性はあります。
＊：今まで報告されているものとして、胎盤早期剥離、肝臓がん、免疫系の異常があります。

iPS細胞からクローン

iPS細胞には、元の体細胞（例えば皮膚細胞）の履歴（DNAメチル化、遺伝子の突然変異）が消えずに残っているため、自然な受精卵と異なり、遺伝子の履歴は完全に白紙にはなっていません。履歴を別の言い方をすれば、発生や分化ののちに染色体や細胞に起こる変化（エピジェネティックな変化）のことで、履歴は受精卵の時点ではないものなのです。元の細胞ごとにエピジェネティックな変化が異なる履歴として残るため、作製された個体はクローンには近いけれども、完璧なクローンではないのです。従って、用いるiPS細胞ごとにその履歴が異なってしまうため、iPS細胞を使ってクローンを作製することは非常に難しいのです。また、iPS細胞由来の個体では、体細胞核移植によるクローン個体のような異常が出ない（出にくい）理由が、世代を経るときに、精子や卵子を形成する段階ではじめて、元の個体の細胞の発生や分化で染色体に刻印された履歴が、全部消されるためです。もちろん体細胞突然変異などは消えませんが、いわゆる発生の履歴は、次の世代に受け渡すときには、いったん全部消される。その上で、遺伝子に刷り込みという新しいエピジェネティックな変化が起こり、オスとメスに特有な初期条件を整えます。体細胞核移植によるクローンの場合は、受精というプロセスをとばしてしまうので履歴が残ります。iPS細胞は世代を越えればリセットされ、異常は出ないかもしれませんが、リプログラミングのまま、再生組織を体に入れるた場合、どうなるかははっきりとわかっていません。以上の理由から、iPS細胞の作製はエピジェネティックな変化が蓄積されていない若い時に行うのがベストだと考えています。

iPS細胞のがん化の問題

iPS細胞で最も懸念される事項は再生組織を人体に移植したあと、以下の理由によりがん化する恐れがあることです。一つは細胞に導入した山中４因子のうち特にc-Mycがん遺伝子の再活性化が懸念されています。そこでc-Mycを除いた3因子ではiPS細胞の樹立効率が極端に減少（0.2％）（4因子でも1％以下と言われている）してしまう問題があります。現在は他の遺伝子を導入してみる、あるいは化学物質を調合して投与して2因子だけでiPS細胞を効率に樹立する方法が開発されつつあります。また、導入用ウイルスベクターによるゲノムへの遺伝子挿入時の傷ががん化の原因となることがありますので、傷を回避する方法としてプラスミドなどの染色体に残らないベクターを使用する方法やセンダイウイルスを利用する方法があります。センダイウイルスはRNAウイルスであるため細胞の核内に侵入せず、ゲノム（DNA）に組み込まれない（安全性が高い）ため遺伝子に傷がつきにくく、効率的な遺伝子導入が可能、そしてヒトに対する病原性がない利点があります。つまり、導入した遺伝子が一度作ったタンパク質が引き金となり、iPS化が進んでしまえば、導入した遺伝子はいらないと言えます。当院契約の細胞加工施設はこの方法を採用していますので、がん化の恐れは少ないと言えます。その他、考えられる危険因子として分化しきれなかった未分化のiPS細胞が最終製品に残っている場合、移植後に増殖して腫瘍になる可能性と一度分化させた細胞が何らかの条件で先祖帰り（iPS細胞に戻ってしまう）して腫瘍になる可能性があります。どちらの場合でも、移植した後も定期的に移植部位に腫瘍が発生していないかチェックすることで早期発見すれば、問題ないと考えます。

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